5ª PRÁCTICA
15/10/19
PRÁCTICA Nº 5: "DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE ANTI-ESTREPTOLISINA O (ASO)"
Analito: ASO-Latex
Método: Aglutinación en porta
PRINCIPIO DEL MÉTODO
El ASO-Látex es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de anti-estreptolisina O (ASO) en suero humano. Las partículas de látex recubiertas con estreptolisina O (SLO) son aglutinadas por anticuerpos ASO presentes en la muestra del paciente.
SIGNIFICADO CLÍNICO
La estreptolisina O es una exoenzima inmunogénico tóxico producido por estreptococos beta-hemolíticos de los grupos A, C y G. La cuantificación de los anticuerpos ASO se utiliza para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades como las fiebres reumáticas, glomerulonefritis aguda, y otras infecciones estreptocócicas. Las fiebres reumáticas es una enfermedad inflamatoria que afecta al tejido conectivo de diversas zonas del cuerpo humano (piel, corazón, articulaciones, etc,...) y la glomerulonefritis aguda es una inflamación del riñón que afecta principalmente a los glomérulos renales.
REACTIVOS
Todos los componentes de origen humano han resultado ser negativos para el antígeno HBs, HCV y para el anti-VIH (1/2). Sin embargo, deben tratarse con precaución como potencialmente infecciosos.
MATERIAL NECESARIO
Método semicuantitativo:
Realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9 g/L.
Antes de empezar la práctica, atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo disminuye a bajas temperaturas.
Examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación inmediatamente después de mover la tarjeta. La presencia de aglutinación indica una concentración de ASO igual o superior a 200 UI/mL.
En este método semicuantitativo, se define el título como la dilución mayor que da resultado positivo.
CÁLCULOS
La concentración aproximada de ASO en la muestra del paciente se obtiene aplicando la siguiente fórmula:
200 x Título de ASO= UI/mL
RESULTADO
El resultado del método semicuantitativo ha sido negativo, por lo que no hemos podido saber el título de ASO.
VALORES DE REFERENCIA
Hasta 200 UI/mL (adultos) y 100 UI/mL (niños < 5 años).
LIMITACIONES DEL MÉTODO
- La artritis reumatoide, escarlatina, amigdalitis, infecciones estreptocócicas diversas y algunos portadores sanos pueden dar resultados falsamente positivos.
- Infecciones recientes y niños con edades comprendidas entre 6 meses y 2 años, pueden dar lugar a resultados falsamente negativos.
- Una determinación aislada no da información suficiente acerca del estado actual de la enfermedad. En casos dudosos y con el propósito de seguir la enfermedad, se recomienda repetir la prueba a intervalos quincenales durante 4 o 6 semanas.
- El diagnóstico clínico no debe realizarse únicamente con los resultados de un único ensayo, sino que debe considerarse al mismo tiempo los datos clínicos del paciente.
NOTAS
PRÁCTICA Nº 5: "DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE ANTI-ESTREPTOLISINA O (ASO)"
Analito: ASO-Latex
Método: Aglutinación en porta
PRINCIPIO DEL MÉTODO
El ASO-Látex es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de anti-estreptolisina O (ASO) en suero humano. Las partículas de látex recubiertas con estreptolisina O (SLO) son aglutinadas por anticuerpos ASO presentes en la muestra del paciente.
SIGNIFICADO CLÍNICO
La estreptolisina O es una exoenzima inmunogénico tóxico producido por estreptococos beta-hemolíticos de los grupos A, C y G. La cuantificación de los anticuerpos ASO se utiliza para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades como las fiebres reumáticas, glomerulonefritis aguda, y otras infecciones estreptocócicas. Las fiebres reumáticas es una enfermedad inflamatoria que afecta al tejido conectivo de diversas zonas del cuerpo humano (piel, corazón, articulaciones, etc,...) y la glomerulonefritis aguda es una inflamación del riñón que afecta principalmente a los glomérulos renales.
REACTIVOS
- Látex: Suspensión de partículas de látex recubiertas con SLO, pH 8'2. Conservante.
- Control + (Tapón rojo): Suero humano, con una concentración de ASO > 200 UI/mL. Conservante.
Todos los componentes de origen humano han resultado ser negativos para el antígeno HBs, HCV y para el anti-VIH (1/2). Sin embargo, deben tratarse con precaución como potencialmente infecciosos.
MATERIAL NECESARIO
- Kit de ASO-Látex.
- Palillos.
- Puntas de pipeta amarillas.
- Bote de orina ("contenedor de desechos"):
- Tarjeta.
- Pipeta automática de 10-100 microlitros.
- Solución salina fisiológico (SSF).
- Hemos utilizado el control + como suero del paciente.
Método semicuantitativo:
Realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9 g/L.
Antes de empezar la práctica, atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo disminuye a bajas temperaturas.
- En primer lugar, depositar 50 microlitros de SSF en cada uno de los círculos de la tarjeta.
Nota: Hemos depositado la solución salina fisiológica en la tapa del bote de orina para que sea más fácil su recogida con la pipeta.
- Echar 1 gota de control + ("suero del paciente") en el círculo nº1 de la tarjeta. Homogeneizar el control + con la solución salina fisiológica por pipeteado y transferir 50 microlitros al círculo nº 2. Homogeneizar y volver a transferir 50 microlitros del 2º círculo al 3º. Repetir este proceso en todos los círculos de la tarjeta, desechando los 50 microlitros sobrante del círculo nº6 de la tarjeta (último) al bote de orina.
Nota: utilizar puntas de pipeta distintas para homogeneizar cada dilución.
- Posteriormente, mezclar el reactivo de ASO-látex vigorosamente antes de usar y depositar 1 gota (50 microlitros) de éste en cada uno de los 6 círculos de la tarjeta.
- Homogeneizar con palillos distintos cada dilución, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del círculo.
- Mover suavemente la tarjeta con la mano durante 2 minutos. El exceso de tiempo puede originar la aparición de falsos positivos.
Examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación inmediatamente después de mover la tarjeta. La presencia de aglutinación indica una concentración de ASO igual o superior a 200 UI/mL.
En este método semicuantitativo, se define el título como la dilución mayor que da resultado positivo.
CÁLCULOS
La concentración aproximada de ASO en la muestra del paciente se obtiene aplicando la siguiente fórmula:
200 x Título de ASO= UI/mL
RESULTADO
El resultado del método semicuantitativo ha sido negativo, por lo que no hemos podido saber el título de ASO.
VALORES DE REFERENCIA
Hasta 200 UI/mL (adultos) y 100 UI/mL (niños < 5 años).
LIMITACIONES DEL MÉTODO
- La artritis reumatoide, escarlatina, amigdalitis, infecciones estreptocócicas diversas y algunos portadores sanos pueden dar resultados falsamente positivos.
- Infecciones recientes y niños con edades comprendidas entre 6 meses y 2 años, pueden dar lugar a resultados falsamente negativos.
- Una determinación aislada no da información suficiente acerca del estado actual de la enfermedad. En casos dudosos y con el propósito de seguir la enfermedad, se recomienda repetir la prueba a intervalos quincenales durante 4 o 6 semanas.
- El diagnóstico clínico no debe realizarse únicamente con los resultados de un único ensayo, sino que debe considerarse al mismo tiempo los datos clínicos del paciente.
NOTAS
- En esta práctica no hemos realizado el método cualitativo.
- Control +: caduca en enero de 2021.
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