7ª PRÁCTICA
22/10/19
PRÁCTICA Nº7: "DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE REAGINAS PLASMÁTICAS"
Analito: RPR-carbon
Método: Aglutinación en porta
PRINCIPIO DEL MÉTODO
RPR-carbón es una técnica no treponémica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de reaginas plasmáticas en suero humano. Las partículas de carbón sensibilizadas con una mezcla de lípidos, son aglutinadas en presencia de reaginas presentes en la muestra del paciente afectado por sífilis.
SIGNIFICADO CLÍNICO
Las reaginas son un grupo de anticuerpos dirigidos contra componentes del propio organismo, originadas en pacientes que sufren infección por Treponema pallidum, agente causal de la sífilis. Este microorganismo produce lesiones en el hígado y corazón, liberando al torrente circulatorio pequeños fragmentos de estos órganos no reconocidos por el propio individuo. El sistema inmunológico del paciente reacciona dando lugar a la formación de reaginas, anticuerpos frente a estos fragmentos.
El ensayo es útil para seguir la respuesta a la terapia antibiótica.
REACTIVOS
RPR-carbón: Homogeneizar el reactivo con suavidad antes de su uso.
Abrir el vial de RPR-carbón y acoplar la micropipeta al vial dispensador de plástico y aspirar por succión la cantidad de reactivo necesaria. Una vez terminado el ensayo, devolver la cantidad sobrante a su envase original y lavar la micropipeta y vial con agua destilada.
MATERIAL NECESARIO
Antes de empezar ambos métodos, hemos recortado con unas tijeras cada tarjeta para cada persona del grupo, de manera que cada uno tenemos dos círculos de la tarjeta.
Método cualitativo:
En esta práctica sólo hemos depositado en uno de los círculos, una gota de control + ("muestra del paciente") y una gota (20 microlitros) de RPR-carbón con el dispensador.
A continuación, hemos mezclado ambas gotas con un palillo (procurando de extender la mezcla por toda la superficie interior del círculo) y lo hemos situado sobre el agitador mecánico rotatorio a 80-100 r.p.m. durante 8 minutos.
RESULTADO
El resultado de esta práctica ha sido positivo, debido a la presencia de aglutinación.
Tipo de aglutinación: agregados pequeños, por lo que sería un reactivo débil.
LECTURA E INTERPRETACIÓN
Examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación inmediatamente después de retirar el porta del agitador. Agitar el porta manualmente un par de veces antes de realizar la lectura.
INTERPRETACIÓN
- Agregados grandes o medianos: Reactivo.
- Agregados pequeños: Reactivo débil.
- Ningún agregado o ligera rugosidad: No Reactivo.
NOTAS
* Durante los 8 minutos de reacción no exponer la tarjeta a una fuente de calor o de luz intensa para minimizar la evaporación. Dicha evaporación podría causar una falsa aglutinación y por tanto resultados falsos positivos.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
- La prueba RPR-carbón no es específica para el diagnóstico de sífilis.
- Un resultado negativo no excluye el diagnóstico de la sífilis.
- La mononucleosis infecciosa, neumonía viral, toxoplasmosis, embarazo y enfermedades autoinmunes pueden causar falsos resultados positivos.
PRÁCTICA Nº7: "DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE REAGINAS PLASMÁTICAS"
Analito: RPR-carbon
Método: Aglutinación en porta
PRINCIPIO DEL MÉTODO
RPR-carbón es una técnica no treponémica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de reaginas plasmáticas en suero humano. Las partículas de carbón sensibilizadas con una mezcla de lípidos, son aglutinadas en presencia de reaginas presentes en la muestra del paciente afectado por sífilis.
SIGNIFICADO CLÍNICO
Las reaginas son un grupo de anticuerpos dirigidos contra componentes del propio organismo, originadas en pacientes que sufren infección por Treponema pallidum, agente causal de la sífilis. Este microorganismo produce lesiones en el hígado y corazón, liberando al torrente circulatorio pequeños fragmentos de estos órganos no reconocidos por el propio individuo. El sistema inmunológico del paciente reacciona dando lugar a la formación de reaginas, anticuerpos frente a estos fragmentos.
El ensayo es útil para seguir la respuesta a la terapia antibiótica.
REACTIVOS
- RPR-carbón: Partículas de carbón sensibilizadas con una mezcla de lípidos, cardiolipina, lecitina y colesterol, en tampón fosfato 20 mmol/L. Conservante. pH 7'0.
- Control + (Tapón rojo): Suero artificial con un título de reaginas > o igual a 1/4.
- Control - (Tapón azul): Suero animal. Conservante.
RPR-carbón: Homogeneizar el reactivo con suavidad antes de su uso.
Abrir el vial de RPR-carbón y acoplar la micropipeta al vial dispensador de plástico y aspirar por succión la cantidad de reactivo necesaria. Una vez terminado el ensayo, devolver la cantidad sobrante a su envase original y lavar la micropipeta y vial con agua destilada.
MATERIAL NECESARIO
- Pipeta automática de 20-200 microlitros.
- Puntas amarillas de pipeta.
- Bote de orina ("contenedor de desechos").
- Tarjeta con 8 círculos.
- Agitador mecánico rotatorio.
- Hemos utilizado el control + como muestra del paciente.
Antes de empezar ambos métodos, hemos recortado con unas tijeras cada tarjeta para cada persona del grupo, de manera que cada uno tenemos dos círculos de la tarjeta.
Método cualitativo:
- Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo disminuye a bajas temperaturas.
- Depositar una gota de cada uno de los controles + y - sobre los dos círculos distintos del trozo de la tarjeta recortada.
- Mezclar el reactivo RPR-carbón vigorosamente antes de usar. Invertir el vial dispensador y presionar ligeramente para eliminar burbujas de aire.
- Situar la micropipeta en posición vertical y perpendicular a la tarjeta, y dispensar una gota (20 microlitros) de este reactivo junto a cada una de las gotas anteriores.
- Mezclar las gotas con un palillo o puntas de pipeta, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del círculo. Emplear palillos o puntas de pipeta distintas para cada muestra.
- Situar la tarjeta sobre un agitador rotatorio a 80-100 r.p.m. durante 8 minutos *. El exceso de tiempo puede originar la aparición de falsos positivos.
En esta práctica sólo hemos depositado en uno de los círculos, una gota de control + ("muestra del paciente") y una gota (20 microlitros) de RPR-carbón con el dispensador.
A continuación, hemos mezclado ambas gotas con un palillo (procurando de extender la mezcla por toda la superficie interior del círculo) y lo hemos situado sobre el agitador mecánico rotatorio a 80-100 r.p.m. durante 8 minutos.
RESULTADO
El resultado de esta práctica ha sido positivo, debido a la presencia de aglutinación.
Tipo de aglutinación: agregados pequeños, por lo que sería un reactivo débil.
LECTURA E INTERPRETACIÓN
Examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación inmediatamente después de retirar el porta del agitador. Agitar el porta manualmente un par de veces antes de realizar la lectura.
INTERPRETACIÓN
- Agregados grandes o medianos: Reactivo.
- Agregados pequeños: Reactivo débil.
- Ningún agregado o ligera rugosidad: No Reactivo.
NOTAS
* Durante los 8 minutos de reacción no exponer la tarjeta a una fuente de calor o de luz intensa para minimizar la evaporación. Dicha evaporación podría causar una falsa aglutinación y por tanto resultados falsos positivos.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
- La prueba RPR-carbón no es específica para el diagnóstico de sífilis.
- Un resultado negativo no excluye el diagnóstico de la sífilis.
- La mononucleosis infecciosa, neumonía viral, toxoplasmosis, embarazo y enfermedades autoinmunes pueden causar falsos resultados positivos.
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